ICS71.040.40 C53T/XMSSAL 厦门市供厦食品安全团体标准 T/XMSSAL0070—2023 供厦食品动物源性食品中120种兽药残留 的筛查液相色谱-高分辨质谱法 Screeningmethodof120veterinarydrugsinanimal-derivedfoodsforXiamen— Liquidchromatography-highresolutionmassspectrometry 2023-06-20发布 2023-06-20实施 厦门市食品安全工作联合会 发布 全国团体标准信息平台 T/XMSSAL0070—2023 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由厦门市食品安全工作联合会提出并归口。 本文件主要起草单位：厦门海关技术中心、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、厦门市食品 药品质量检验研究院、厦门市产品质量监督检验院、厦门市标准化研究院、福建省农业科学院质量标准 与检测技术研究所、厦门大学。 本文件主要起草人：徐敦明、伊雄海、林永辉、吴彩胜、傅建炜、施冰、高静、林伟琦、沈群红、 丁琳、曾三妹、沈鹭英、修凡超、赵子彦、吴媛、吴俊杰、罗家煌。 全国团体标准信息平台 T/XMSSAL0070—2023 2供厦食品动物源食品中120种兽药残留量的筛查液相色谱 -高分辨质谱法 1范围 本文件规定了动物源食品中120种兽药（详细信息见附录A）残留的液相色谱-高分辨 质谱筛查方法。 本文件适用于畜禽肉、水产品、蜂蜜、牛奶、鸡蛋等动物源食品中120种兽药残留的定 性筛查测定，其他动物源食品可参照执行。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T0001-2016出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定 3术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4方法提要 试样中的兽药残留用乙腈提取，盐析后，采用基质分散固相萃取净化，液相色谱-高分 辨质谱仪筛查测定。 5试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682规定的一级水。 5.1乙腈（CH3CN）：色谱级。 5.2甲醇（CH3OH）：色谱级。 5.3正己烷（C6H14）：色谱级。 5.4甲酸（CH2O2）：色谱级。 5.5氟化铵（NH4F）。 5.6氯化钠（NaCl）。 5.7无水硫酸镁（MgSO4）。研磨后在500℃马弗炉内烘5h，冷却后取出装瓶，贮于干燥 器中，备用。 5.85%乙腈水溶液：准确移取5mL乙腈（5.1），用水稀释到100mL。 5.9乙腈饱和的正己烷：取正己烷（5.3），加入适量乙腈（5.1），静置分层后，上层即 为乙腈饱和正己烷。 全国团体标准信息平台 T/XMSSAL0070—2023 35.10含0.1%甲酸的乙腈：准确移取1mL甲酸（5.4），用乙腈（5.1）稀释到1000mL。 5.110.1%甲酸溶液：准确移取1mL甲酸（5.4），用水稀释到1000mL。 5.120.5mmol/L氟化铵水溶液：准确称取0.0185g氟化铵（5.5），用水溶解并稀释到1 000mL。 5.13标准品：孔雀石绿及其代谢物、β受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类、苯并咪唑类 类、磺胺及磺胺增效剂类、喹诺酮及氟喹诺酮类、大环内酯类、抗球虫药类、精神控制类、 抗病毒类药、甲砜霉素和氟苯尼考、氨苯砜及其代谢物，五氯酚酸钠以及呋喃苯烯酸钠等标 准品的信息见附录A中表A.1。 5.14标准储备液：按附录A中表A.1的分组，分别准确称取10mg(精确到0.1mg)120 种兽药标准品，并采用证书上推荐的溶剂溶解并定容，得到浓度为1.0mg/mL储备液，或购 买商品化的混标溶液。其中B组、C组、D组、E组、F组、G组、I组、J组可在-18℃以下 保存12个月，A组、H组可在-18℃以下保存6个月。 5.15混合标准工作液：根据方法筛查限量的浓度，准确量取各组标准储备液（5.15）适量， 用甲醇稀释并定容至合适浓度。混合标准工作液可在4℃下保存7天。 5.16十八烷基硅烷键合相粉末（C18）：60目～80目。 5.17滤膜：0.22μm有机相滤膜。 6仪器和设备 6.1液相色谱-高分辨质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI），分辨率不小于20000[质荷比 （m/z）等于200，按半峰宽（FWHM）计]。 6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。 6.3均质器。转速可达20000r/min。 6.4离心机：转速可达10000r/min。 6.5超声波震荡器。 6.6涡旋振荡器。 6.7氮吹仪。 7试样制备与保存 7.1试样的制备 7.1.1畜禽肉、水产品：随机取原始样品，去除不可食部分，取出有代表性样品约500g。 用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。 7.1.2牛奶、蜂蜜：从原始样品取出有代表性样品约500g，充分混匀，装入洁净容器作 为试样，密封，并标明标记。 7.1.3鸡蛋：从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀， 装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。 7.2试样贮存 将制备好的试样分成两份，作为测试样和留样，于-18℃密封贮存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 8分析步骤 全国团体标准信息平台 T/XMSSAL0070—2023 48.1前处理 8.1.1提取 准确称取2g（精确至0.01g）试样于50mL塑料离心管中，加入8mL乙腈，于均质 器上以15000rpm均质2min，加入1gNaCl，涡旋混匀1min，超声5min，4000rpm离 心5min，取上清液，残渣用8mL乙腈同上操作，再提取一次。合并上清液，待净化。 8.1.2净化 将上清液转移至装有50mgC18、900mgMgSO4（5.7）的50mL离心管中，涡旋混匀5min， 4000rpm离心5min，取上清液，在40℃以下水浴中氮吹至干。残渣用1mL5%乙腈水 溶液溶解，加入1mL乙腈饱和的正己烷，涡旋混匀，10000rpm离心5min，取下层溶液， 过0.22μm有机相滤膜，上机测定。 8.1.3基质匹配工作溶液 按(8.1.1)和(8.1.2)所述方法处理制备基质空白溶液，取各组标准工作溶液适量，用基 质空白溶液稀释，配制成合适浓度的基质匹配工作溶液。 8.2测定 8.2.1液相色谱参考条件 a)色谱柱：C182.1mm（内径）×100mm（柱长），粒径3.5μm，或性能相当者； b)流动相：A：0.1%甲酸溶液；B：含0.1%甲酸的乙腈（正模式） A：0.5mmol/L氟化铵溶液；B：乙腈（负模式）； c)流速：400μL/min；梯度洗脱程序见表1，负模式和正模式除流动相不同外，其余 均相同； d)进样量：10µL； e)柱温：35℃。 表1梯度洗脱程序表 梯度时间（min） 流动相A% 流动相B% 0.0 98 2 1.0 98 2 9.0 2 98 12.5 2 98 13.0 98 2 15.0 98 2 8.2.2质谱参考条件 a)离子源：电喷雾ESI源； b)扫描方式：正离子模式，负离子模式； c)分辨率：实际分辨率不小于20000[质荷比（m/z）等于200，按半峰宽（FWHM）计]； d)其他质谱条件见附录B。 8.3空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 全国团体标准信息平台 T/XMSSAL0070—2023 58.4高分辨质谱库建立 输入120种化合物的英文、CAS号及化学式，由高分辨质谱谱库构建软件计算得到每个 化合物的理论质量数，采集120种兽药的碎片离子图谱，获得二级谱图，与相应化合物的保 留时间、精确质量数测定值、中英文名称、CAS号、分子式等信息相关联，完成谱库构建。 谱库信息等见附录A中表A.1以及附录B中表B.1。 8.5定性分析 通过一级质谱全扫描得到化合物碎片离子的精确分子质量（精确到小数点后4位），与 化合物理论分子量的精确质量数的对比，如果样品中的色谱峰的保留时间与标准品一致（偏 差在2.5%范围内，不超过0.5min），所监测定性离子的信噪比S/N≥3，准确质量最大偏差 小于百万分之五(≤5ppm)，二级碎片离子精确质量数的相对偏差百万分之十(≤10ppm)， 则可以初步判断试样中含有该种化合物。对于没有二级碎片离子的化合物，两个定性离子的 信噪比S/N≥3，准确质量最大偏差小于百万分之五(≤5ppm)，则可以初步判断试样中含有 该种化合物。样品中目标化合物检测浓度大于等于方法方法筛查限时判定为阳性结果，确认 存在该兽药。定性分析及判定依据如表2所示。 表2定性分析及判定依据 定性因子 判定标准 备注 方法筛查限 S/N≥3 色谱峰 保留时间偏差 -2.5%～2.5% 不超过0.5min 母离子精确质 量数偏差≤百万分之五(5ppm) 高分辨质谱一、二级同时扫描模式。母离子数和/或子离子数 应满足SN0001-2016附录B1.1.3质谱检测的要求。 碎片离子精确 质量数偏差≤百万分之十(10ppm) 8.6定量分析 对于确认存在的兽药残留，应采用其他定量标准方法定量测定。 9方法筛查限 本方法对120种兽药的方法筛查限见附录表B.1。 10假