ICS07.100 CCSB15/19 WSWXH 新疆维吾尔自治区微生物学会团体标准 T/WSWXH002—2023 代替T/WSWXH002-2022 新疆主要果树和防护林腐烂病菌检测 技术规程 RegulationforrapiddetectionofValsacankerofthefruittreeandtheshelterforest ofXinjiang 2023-10-31发布 2023-10-31实施 新疆维吾尔自治区微生物学会  发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2023 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 3.1PCR检测技术PolymeraseChainReaction...........................................1 3.2rDNA-ITS特异序列rDNAITSsequences.............................................1 3.3序列特异性引物Sequencespecificprimer..........................................1 3.4分生孢子器Pycnidium............................................................1 3.5分生孢子Conidium(复数conidia).................................................1 4方法原理............................................................................1 4.1分类地位........................................................................2 4.2鉴定依据........................................................................2 5主要设备及实验用具..................................................................2 5.1设备............................................................................2 5.2实验用具........................................................................2 6试验材料............................................................................2 6.1培养基..........................................................................2 6.2试剂............................................................................2 7现场检验............................................................................2 7.1取样方法........................................................................2 7.2病害症状........................................................................2 8实验室检测..........................................................................2 8.1分生孢子的显微镜检观察..........................................................2 8.2保湿培养........................................................................3 8.3病原菌的分离和纯化..............................................................3 8.4病原菌形态鉴定..................................................................3 8.5致病性测定......................................................................3 8.6分子生物学检测及鉴定............................................................3 9结果判定............................................................................3 附录A（资料性）培养基................................................................4 附录B（资料性）果树腐烂病形态特征....................................................5 附录C（资料性）苹果树腐烂病致病性测定方法及步骤......................................6 附录D（资料性）属专化型PCR引物检测方法..............................................7 附录E（资料性）种特异性PCR引物检测方法..............................................8 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件中某些内容可能涉及相关知识产权保护内容，本文件的发布机构不承担相关识别等责任。 本文件由新疆农业科学院微生物应用研究所提出。 本文件由新疆维吾尔自治区微生物学会归口。 本文件起草单位：新疆农业科学院微生物应用研究所、石河子大学农学院、阿克苏地区食品安全检 测中心、阿克苏地区林业技术推广服务中心。 本文件主要起草人：宋素琴、赵思峰、高雁、楚敏、张志东、谭慧林、冶海林、曹焕、顾美英、张 煜、张振军、刘倩倩。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/WSWXH002—2023 1新疆主要果树和防护林腐烂病菌检测 技术规程 1范围 本文件描述了苹果、梨树、新疆果树和胡杨、新疆杨、沙枣、毛白杨、刺槐等防护林腐烂病菌分离 鉴定的方法。 本文件适用于阿克苏红富士苹果、库尔勒香梨，胡杨、新疆杨、沙枣、毛白杨、刺槐腐烂病菌的检 测和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T38488微生物快速测定方法 SN/T3069苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌检疫鉴定方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1PCR检测技术PolymeraseChainReaction 利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和脱氧核苷酸等底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量， 对结构和功能分析。 3.2rDNA-ITS特异序列rDNAITSsequences 在rDNA基因中，5.8SrDNA和28SrDNA基因间隔序列称为ITS序列（Internaltranscribed spacer），有极大的保守性,即存在着广泛的异种同源性，其长度和序列变化较大，将其扩增物进行RFLP 或序列分析，可用于对真菌的不同生物型、菌株、种、属进行分类鉴定。 3.3序列特异性引物Sequencespecificprimer 一种测定基因突变的方法。即利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中 之一)与另一共同引物(C)组成引物系统；在引物延伸时，A与B同时竞争靶