(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210939659.8 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 上海市第一人民医院 地址 200080 上海市虹口区武进路85号 (72)发明人 樊永亮　卿雪芹　王晓颖　丁梦斌　 叶一舟　 (74)专利代理 机构 上海元好知识产权代理有限 公司 31323 专利代理师 贾慧琴　包姝晴 (51)Int.Cl. A61K 9/06(2006.01) A61K 33/26(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 47/36(2006.01)A61K 47/61(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 基于ALG包裹的具有活性氧响应的aPD-L1前 药水凝胶及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了基于A LG包裹的具有活性氧响 应的aPD‑L1前药水凝胶及其制备方法。 该方法包 含： 步骤1， 以+3价铁盐、 +2价铁盐、 BSA为原料， 水 浴， 碱性条件下搅拌反应， 获得BSA@Fe3O4； 将 PpIX、 EDC ·HCl、 NHS混合溶解后， 加入BSA@ Fe3O4， 搅拌反应得到PPIx ‑BSA@Fe3O4， 记为PF纳 米颗粒； 步骤2， 以活性氧响应性的连接物、 BSA、 PD‑L1抗体为原料， 混合反应， 得到aPD ‑L1前药； 步骤3， 将 海藻酸钠 ALG、 PF纳米颗粒、 aPD ‑L1前药 充分混合， 得到ALG@PPIx ‑BSA@Fe3O4&aPD‑L1， 将 其加入到含有Ca2+的溶液中， 成胶。 本发明利用 BSA包裹Fe3O4纳米颗粒再外接PpIX， BSA包裹活 性氧响应性的连接物连接的PD ‑L1抗体， 再用AL G 包裹后形成原位水凝胶， 实现了PDT， CDT和免疫 疗法三者的协同治疗从而制备了具有优异的水 凝胶纳米平台， 可满足通过局部治疗调动全身免 疫系统的需求。 权利要求书1页 说明书9页 附图5页 CN 115364045 A 2022.11.22 CN 115364045 A 1.一种基于ALG包裹的具有活性氧响应的aPD ‑L1前药水凝胶的制备方法， 其特征在于， 该方法包含： 步骤1， 制备PF纳米颗粒： 步骤1.1， 以+3价铁盐、 +2价铁盐、 BSA为原料， 水浴加热， 碱性条件下搅拌反应， 获得BSA 包裹Fe3O4纳米颗粒， 记为BSA@F e3O4； 步骤1.2， 将PpIX、 ED C·HCl、 N‑羟基丁二酰亚胺NHS混合溶解后， 加入BSA@Fe3O4， 搅拌反 应， 将PpIX负载到BSA@F e3O4上， 得到P PIx‑BSA@Fe3O4， 记为PF纳米颗粒； 步骤2， 制备aPD ‑L1前药： 以活性氧响应性的连接物、 BSA、 PD ‑L1抗体为原料， 混合反应， 得到aPD‑L1前药； 步骤3， 将海藻酸钠ALG、 PF纳米颗粒、 aPD ‑L1前药充分混合， 得到ALG@PPIx ‑BSA@Fe3O4& aPD‑L1， 将其加入 到含有Ca2+的溶液中， 成胶， 得到基于ALG包裹的具有活性 氧响应的aPD ‑L1 前药水凝胶。 2.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤1.1中， 碱性条件是指加入氢氧化 钠、 氢氧化钾、 氨水中的任意 一种或任意两种以上的混合。 3.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤1.1中， 所述+3价铁盐为FeCl3· 6H2O， 所述+2价铁盐为FeCl2·4H2O， 碱性条件是指加入NaOH， 其中， FeCl3·6H2O， FeCl2· 4H2O， NaOH的摩尔比为1： 1： 10 0～1： 1： 5 00。 4.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤1.2中， PpIX、 EDC ·HCl、 NHS的摩尔 比为1： 3： 3～1： 10： 10 。 5.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述PF纳米颗粒中， PpIX在BSA@Fe3O4的 表面负载率 为59.4％。 6.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤2中， 先将活性氧响应性的连接物、 EDC·HCl、 NHS在DMSO中混合以对活性氧响应性的连接物进行活化处理， 将BSA、 PD ‑L1抗体 在pH为7.4的PBS中混合， 搅拌状态下将活化的活性氧响应性的连接物加入到BSA与PD ‑L1抗 体的混合液中， 在4℃、 黑暗条件下反应8h～16h， 将得到的产物在4℃下透析得到aPD ‑L1前 药纳米颗粒。 7.如权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 活性氧响应性的连接物、 EDC ·HCl、 NHS 的摩尔比为1： 3： 3～1： 10： 10， BSA与 PDL1抗体的摩尔比为1： 1～5:1， DMSO与pH7.4的PBS的体 积比例为1： 20～1： 10 0。 8.如权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 透析条件为： 用截留分子量为8000～ 14000的透析袋透析2 ‑3天。 9.如权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于， 步骤3中， ALG的最终浓度为5mg/mL。 10.一种采用权利要求1 ‑9中任意一项所述的制备方法得到的基于ALG包裹的具有活性 氧响应的aPD ‑L1前药水凝胶， 其特征在于， 该水凝胶的结构式为ALG@PPIx ‑BSA@Fe3O4&aPD‑ L1， 包含： 海 藻酸钠载体、 BSA、 Fe3O4纳米颗粒、 原卟啉PpIX、 aPD ‑L1前药， 其中， BSA包裹Fe3O4 纳米颗粒并外接PpIX形成PPIx ‑BSA@Fe3O4颗粒， 其与aPD ‑L1前药均匀分散在海藻酸钠载体 中， 与Ca2+交换得到所述的水凝胶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115364045 A 2基于ALG包裹的 具有活性氧响应的aPD ‑L1前药水凝胶及其制 备方法 技术领域 [0001]本发明属于水凝胶纳 米复合材料制备及其应用领域， 特别涉及一种基于ALG(海藻 酸钠)包裹的具有活性氧响应的aP D‑L1前药水凝胶及其制备 方法。 背景技术 [0002]近年来， 关于癌症治疗的方法被很多人报道， 传统的放射治疗和化疗仍是现在主 要的治疗手段， 但由放疗和化疗引起的耐药性和副作用是不可忽视的问题。 [0003]免疫治疗在癌 症治疗中显示了巨大的前景， 不仅是2013年 《科学》 杂志评选的年度 最重要的科学突破， 2018年的诺贝尔生理学或医学奖也发给了相关研究。 肿瘤免疫治疗主 要包括免疫检查点抑制剂、 细胞治疗、 肿瘤疫苗等。 但在临床应用中， 只有一小部分晚期癌 症患者对免疫检查点抑制剂单药治疗有反应， 且现有方法对免疫调动不足， 或者通过自身 肿瘤微环境去促进免疫因子的释放 不足。 发明内容 [0004]本发明的目的是克服现有材料对免疫调动不足， 或者通过自身肿瘤微环境去促进 免疫因子的释放不足等 问题， 提供一种基于ALG包裹的具有活性氧响应的aPD ‑L1前药水凝 胶制备与应用。 该方法制备得到的水凝胶纳米平台具备优异的生物相容性和稳定性， 具有 良好的杀伤肿瘤和免疫治疗效果， 为瘤内给药和免疫应激一体化平台的开发提供了一种新 方法， 应用前 景广阔。 [0005]为了达到上述目的， 本发明提供了一种基于ALG包裹 的具有活性氧响应的aPD ‑L1 前药水凝胶的制备 方法， 包含： [0006]步骤1， 制备PF纳米颗粒： [0007]步骤1.1， 以+3价铁盐、 +2价铁盐、 BSA为原料， 水浴加热， 碱性条件下搅拌反应， 获 得BSA包裹F e3O4纳米颗粒， 记为BSA@F e3O4； [0008]步骤1.2， 将PpIX、 EDC ·HCl、 N‑羟基丁二酰亚胺NHS混合溶解后， 加入BS A@Fe3O4， 搅 拌反应， 将PpIX负载到BSA@F e3O4上， 得到P PIx‑BSA@Fe3O4， 记为PF纳米颗粒； [0009]步骤2， 制备aPD ‑L1前药： 以活性氧响应性的连接物、 BSA、 PD ‑L1抗体为原料， 混合 反应， 得到aP D‑L1前药； [0010]步骤3， 将海藻酸钠ALG、 PF纳米颗粒、 aPD ‑L1前药充分混合， 得到ALG@PPIx ‑BSA@ Fe3O4&aPD‑L1， 将其加入到含有Ca2+的溶液中， 成胶， 得到基于ALG包裹的具有活性氧响应的 aPD‑L1前药水凝胶。 [0011]可选地， 步骤1.1中， 碱性条件是指加入氢氧化钠、 氢氧化钾、 氨水中的任意一种或 任意两种以上的混合。 [0012]可选地， 步骤1.1中， 所述+3价铁盐为FeCl3·6H2O， 所述+2价铁盐为FeCl2·4H2O， 碱性条件是指加 入NaOH， 其中， FeCl3·6H2O， FeCl2·4H2O， NaOH的摩尔比为1： 1： 100～1： 1：说　明　书 1/9 页 3 CN 115364045 A 3