(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210812251.4 (22)申请日 2022.07.12 (71)申请人 电子科技大 学 地址 611731 四川省成 都市高新区 （西区） 西源大道 2006号 (72)发明人 吴春惠　谢正鑫　杨耿　李泞汐　 黄虹霖　卫晓丹　杨红　刘贻尧　 李亭亭　秦翔　李顺　 (74)专利代理 机构 成都点睛专利代理事务所 (普通合伙) 51232 专利代理师 敖欢 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/62(2017.01) A61K 41/00(2020.01)A61K 45/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 用于肿瘤NIR-II光热-免疫治疗的仿生药物 及制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫 治疗的仿生纳米药物及制备方法和应用。 仿生纳 米药物包括携载NO供体的NIR ‑II区金纳米光热 核心、 仿生细胞膜外衣、 肿瘤靶向归巢穿透肽； 该 仿生光敏药物能够高效靶向肿瘤并穿透到肿瘤 内部， 在具有高组织穿透性的NIR ‑II激光激发下 通过高效的光热转换效应杀死肿瘤细胞， 并通过 免疫原性死亡方式刺激机体的抗肿瘤免疫响应； 同时， 光热效应促发NO在瘤内特异性释放， 增加 肿瘤内血液灌注， 改善瘤内缺氧微环境， 使肿瘤 相关巨噬细胞由促肿瘤M2型转变为抗肿瘤M1型， 并降低肿瘤细胞表面PD ‑L1的表达， 从而进一步 增强抗肿瘤免疫反应。 本发明为肿瘤高效的光 热‑免疫联合治 疗提供了一种新型纳米制剂。 权利要求书2页 说明书10页 附图8页 CN 115137844 A 2022.10.04 CN 115137844 A 1.一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征在于： 具有逃逸免疫系 统并归巢穿透至肿 瘤内部的能力、 NIR ‑II区光热转换效应和NO控释能力， 所述的仿生纳米 药物的成分包括三部分： 携载NO供体的NIR ‑II区纳米光热剂核心； 包覆所述纳米光热剂的 仿生细胞膜外衣； 赋予肿瘤归巢 穿透能力的肿瘤靶向归巢 穿透肽。 2.根据权利要求1所述的用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征在 于： 所述的携载NO供体的NIR ‑II区纳米光热剂核心， 是通过在具有NIR ‑II区吸收的纳米光 热剂核心的表面共价或非共价连接NO供体分子形成的， 其中纳米光热剂核心的颗粒的长径 范围为15nm～70nm。 3.根据权利 要求1所述的一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征 在于： 所述的纳米光热剂核心， 选自金纳米棒、 金纳米笼、 金纳米星其中一种， 优选金纳米 棒。 4.根据权利 要求1所述的一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征 在于： 所述的NO供体， 选自有机硝酸盐、 二氮烯鎓二醇、 金属 ‑NO络合物、 呋喃烷、 S ‑亚硝基硫 醇SNO和斯德酮亚胺类其中的一种， 优选S ‑亚硝基硫醇SNO。 5.根据权利 要求1所述的一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征 在于： 所述的仿生细胞膜外衣， 选自巨噬细胞膜、 红细胞膜、 外泌体膜其中一种， 优选巨噬细 胞膜。 6.根据权利 要求1所述的一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物， 其特征 在于： 所述的肿瘤靶向归巢 穿透肽， 选自LyP ‑1、 F3、 iRGD、 tLyP ‑1， 优选tLyP ‑1。 7.权利要求1至6任意一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物的制备方 法， 其特征在于包括如下步骤： (1)合成携载NO供体的N IR‑II区金纳米光热剂核心； 在室温25 ‑30℃搅拌条件下将氯金酸、 表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵和硝酸银按 摩尔比1： 200： 0.2 ‑1： 250： 0.3混合， 用一定量盐酸调节pH值约10～11后， 按氯金酸： 坏血酸： 硼氢化钠摩尔比1:1.0:0.01 ‑1:2:0.02依次加入还原剂抗坏血酸和硼氢化钠， 静置反应3 ‑ 12小时， 合成等离子共振吸收峰在800 ‑1350nm NIR‑II区的金纳米棒GNR， GNR的长径为15 ‑ 70nm， 短径为2.5 ‑20nm； 随后， 首先对金纳米棒GNR通过正硅酸乙酯水解法进行了介孔二氧化硅层的包封， 硅层 厚度为8‑10nm， 通过共孵育 法携载NO供体分子， 如 有机硝酸盐、 二氮烯鎓二醇、 金属 ‑NO络合 物、 呋喃烷和斯德酮亚胺类其中的一种； 为了接枝S ‑NO侧链， 对二氧化硅层包覆了巯基丙基 三甲氧基硅烷获得了 ‑SH修饰， 用于与亚硝酸叔丁酯反应生成SNO侧链， 最终成功获得携载 NO供体的N IR‑II区金纳米光热剂核心； (2)构建细胞膜仿生的NIR ‑II光敏药物： 对携载NO供体 的NIR‑II区金纳米光热剂用嵌 有肿瘤归巢穿透肽tLyp ‑1的仿生细胞膜外衣进行仿生包覆， 以获得免疫 逃逸和肿瘤 靶向及 深层渗透功能； 首先将线性异双功能试剂二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 ‑聚乙二醇 ‑琥珀酰亚胺酯 DSPE‑PEG‑NHS和NH2‑tLyp‑1通过酰胺反应连接， 反应时DSPE ‑PEG‑NHS与NH2‑tLyp‑1摩尔比 为1:1.0‑1:1.5， 得到DSPE ‑PEG‑tLyp‑1； 再将细胞膜、 DSPE ‑PEG‑tLyp‑1和携载NO供体的 NIR‑II区金纳米光热剂核心， 通过水浴超声、 冰浴探头超声和低温共孵育一定时间后， 通过 膜挤出器来回挤压获得最终完整仿生药物。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115137844 A 28.根据权利要求7所述的一种用于肿瘤NIR ‑II光热‑免疫治疗的仿生纳米药物的制备 方法， 其特 征在于： 首先是对巨噬细胞膜提取， 将培养瓶中的巨噬细胞收集到离心管中， 用预冷的磷酸盐 缓冲液PBS洗涤收集到的细胞， 加入含苯甲基黄酰氟 的膜蛋白提取试剂， 冰浴30分钟后， 通 过玻璃匀浆器冰浴下匀浆多次以破碎细胞， 通过多次在4℃低温700g离心洗涤后收集上清， 以去除细胞核和未破碎的细胞； 随后将上清再次4℃低温14000g离心后收集沉淀， 得到巨噬 细胞膜碎片，‑20℃保存。 9.权利要求1至 6任意一项所述的仿生纳米药物的应用， 其特 征在于： 所述仿生纳米药物通过尾静脉给药至生物体内， 采用波长为900～1350nm的NIR ‑II激 光中任一种照射5～10分钟， 照射激光的功率密度为0.1～1.5W/cm2； 所述仿生纳米药物通 过肿瘤归巢穿透肽介导的跨细胞转运作用靶向肿瘤缺氧中心， 在NIR ‑II激光激发下， 通过 光热效应消融肿瘤细胞， 并诱导肿瘤细胞发生肿瘤 免疫原性死亡， 释放损伤相关模式分子 DAMPs， 激活机体免疫应答； 同时， 释放的NO有效增加肿 瘤血管通透性， 缓解肿 瘤缺氧情况， 降低PD‑L1的表达， 并进一步重极化肿 瘤相关巨噬细胞为M1型， 从而缓解免疫抑制微环境， 放大免疫抗肿瘤效应。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115137844 A 3