(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211122371.8 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 吉林大学 地址 130012 吉林省长 春市前进大街269 9 号 (72)发明人 于彬　于湘晖　孔维　冯馨瑶　 刘文茉　 (74)专利代理 机构 长春市恒誉 专利代理事务所 (普通合伙) 22212 专利代理师 李荣武 (51)Int.Cl. C12N 5/0797(2010.01) C12N 7/00(2006.01) A61K 35/761(2015.01) A61K 35/30(2015.01)A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 神经干细胞源 “溶瘤”外泌体及其用途 (57)摘要 本发明涉及生物医学领域， 涉及一种神经干 细胞源“溶瘤”外泌体及其用途。 具体涉及到一种 以溶瘤腺病毒感染神经干细胞后分离获得的包 含病毒组分且具有溶瘤病毒功能的外泌体的设 计、 分离及其应用。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115478053 A 2022.12.16 CN 115478053 A 1.一种神经干细胞源 “溶瘤”外泌体， 其特征在于： 以溶瘤病毒感染神经干细胞后分离 得到的含有病毒组分的外泌体具有优良的抗肿瘤作用。 2.如权利要求1所述的神经干细胞源 “溶瘤”外泌体， 其特征在于： 其中所述的外泌体衍 生自溶瘤腺病毒感染的神经干细胞。 3.如权利要求2所述的神经干细胞源 “溶瘤”外泌体， 其特征在于： 其中所述的溶瘤病 毒 为衣壳修饰的溶瘤腺病毒。 4.如权利要求1所述的神经干细胞源 “溶瘤”外泌体， 其特征在于： 其可用于治疗的肿瘤 类型包括但不限于脑胶质瘤、 黑色素瘤、 结直肠癌等。 5.如权利要求1所述的神经干细胞源 “溶瘤”外泌体， 其特征在于： 其给药方式包括瘤内 注射、 静脉注射、 颅内注射 等途径。 6.权利要求2 ‑5任一项所述的神经干细胞源 “溶瘤”外泌体用于制备肿瘤治疗药物和疫 苗的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115478053 A 2神经干细胞源 “溶瘤”外泌体及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域,特别涉及一种用于肿瘤治疗的神经干细胞源 “溶瘤”外 泌体及其用途。 背景技术 [0002]溶瘤病毒疗法是通过选择性地在肿瘤细胞中复制， 破坏并溶解细胞， 同时表达治 疗基因来杀死肿瘤细胞， 并伴随肿瘤裂解释放细胞因子和肿瘤抗原进一步调节肿瘤免疫微 环境的治疗方法。 与其他肿瘤疗法相比， 溶瘤病毒(Oncolytic  Viruses)具有杀伤 效率高、 靶向精确、 副作用和耐药少、 成本低等优点， 这些都使 得溶瘤病毒疗法与手术治疗、 放疗、 化 疗和靶向治疗相比， 成为一种更有前景的癌症治疗方法[1]。 目前， 有多种溶瘤病毒被用于 肿瘤的免疫治疗临床试验， 与其他溶瘤病毒相比， 溶瘤腺病毒具有高度的遗传稳定性和低 致病性， 它们相对来说更容易稳定地维持在高滴度和高纯度， 这使得它们 特别适合于应用 到疾病治疗中， 无论是基因和癌症治疗还是疫苗的开发， 因此溶瘤腺病毒成为其中使用最 多的病毒[2]。 [0003]结合基因治疗和溶瘤病毒治疗的双重优势， 以溶瘤腺病毒为载体介导的基因治疗 被广泛应用到临床实验当中， 例如DNX ‑2401(Delta ‑24‑RGD)被用来进行恶性胶质瘤的治疗 [3,4],VCN ‑01被用来进行胰腺癌的治疗[5]， Ad4 ‑H5‑Vtn作为流感疫苗也进入到临床研究 中[6]。 这些临床研究都展示出溶瘤腺病毒作为一种基因治疗的载体在未来多种疾病治疗 中的潜力。 然而溶瘤腺病毒也依然存在一些限制， 阻碍其进一步的应用和发展。 一方面是给 药方式限制， 病毒 无法通过静脉注射给药， 因为静脉注射后腺病毒 无法专一靶向病灶， 这会 导致能够到达肿瘤部位并行使功能的病毒数量骤减[7]； 另外病毒无法穿透生理屏障如血 脑屏障等， 对于恶性胶质瘤等疾病的治疗效果大大 受限， 出于这些限制， 目前包括溶瘤腺病 毒在内的绝大多 数溶瘤病毒的给药方式是瘤内注 射， 但是这种给药方式也存在很多问题导 致效果受限， 病毒在瘤内的滞留性差， 可能会在周围正常组织中非特异 性脱落， 这会导致治 疗效果差， 脱落的病毒还会被机体的免疫系统识别并清除， 甚至引发严重的炎症反应[8, 9]； 另一方面是免疫调节功能的 限制， 单纯的病毒治疗所能够引起的免疫调节能力有限， 难 以引发高效的抗肿瘤免疫， 另外免疫抑制肿瘤微环境的存在也进一步限制了能够抗肿瘤的 T细胞反应， 针对这个限制， 目前常用的解决方式是改造病毒的基因组， 使其表达具有免疫 调节能力的小分子， 或者与抗体联合使用， 从而提升抗肿瘤免疫的水平[10,1 1]。 [0004]尽管溶瘤腺病毒构建策略日趋成熟， 然而对于病毒骨架的改造仍然存在很多问 题， 病毒的基因组 能够插入的片段大小有限， 且这种改造方式很可能会影响病毒的包装， 另 外， 传统的病毒 改造方式很难同时改善两种使用限制， 而如何同时提升病毒的体内靶向性 以及免疫调节能力， 进一步优化病毒的使用效果至 关重要。 本发 明旨在提供一种新的模型， 在保留病毒原有使用优势的基础上， 同时提升体内靶向性及 免疫调节 能力， 进一步提升病 毒载体的应用前 景。 [0005]外泌体是通过核内体凹陷形成多泡体(MVBs)， 并且通过多泡体和脂膜融合释放到说　明　书 1/7 页 3 CN 115478053 A 3