ICS 65.020.20 CCS 21 B 05 辽宁省 地方标准 DB21/T 4355—2025 花生抗白绢病鉴 定技术规程 Rule for evaluation of resistance to peanut stem rot caused by Sclerotium rolfsii 2025 - 12 - 16发布 2026 - 01 - 16实施 辽宁省市场监督管理局 发布 DB21/T 4355—2025 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的 规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出 并归口。 本文件起草单位：沈阳农业大学。 本文件主要起草人：黄玉茜、丁奥、高洁、韩迪、田培聪、王趁、刘闯、杜思彤、王雯睿。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：沈阳市和平区太原北街 2号，联系电话： 024-23447862 。 文件起草单位通讯地址：沈阳市沈河区东陵路 120号，联系电话： 024-88487148 。DB21/T 4355—2025 1 花生抗白绢病鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了花生抗白绢病鉴定的 准备、接种、调查、抗病性评价 和鉴定结果汇总 等技术内容。 本文件适用于花生白绢病抗性 的鉴定及评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4407.2 经济作物种子 第2部分：油料类 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 准备 4.1 培养基 4.1.1 PDA培养基 称取 200 g马铃薯， 洗净去皮切碎， 加入 1000 mL 水， 煮沸 20 min～30 min， 纱布过滤， 补水至 1000 mL，加入 15 g琼脂和 20 g葡萄糖，搅拌均匀后分装至 250 mL三角瓶， 121℃高压灭菌 20 min。 4.1.2 燕麦片培养基 称取 20 g燕麦片于 500 mL三角瓶内，加入 10 mL水搅拌至燕麦片呈湿润状态， 121℃高压灭菌 20 min。 4.2 接种物 4.2.1 病原物分离 从具有白绢病典型症状的花生植株上收集茎秆基部的菌核，将收集到的菌核用 75%乙醇处理 30 s， 再用 30%次氯酸钠 表面消毒 2 min，将消毒后的菌核用无菌水冲洗后于无菌环境中自然风干，将风干后 的菌核置于 PDA平板培养基表面，于 25℃培养箱内培养至菌核萌发 ，产生菌丝 。花生白绢病症状见附 录B。 4.2.2 病原物鉴定 观察菌丝和菌核形态 ，使用 rDNA -LSU基因片段引物进行 PCR扩增测序 ，鉴定为齐整小核菌DB21/T 4355—2025 2 （Sclerotium rolfsii Sacc.） ，经致病性测定后确定为供接种菌株。 花生白绢病菌丝和菌核形态见附录 A。 4.2.3 病原物保存 在4℃条件下保存 菌株，或用 20%的甘油溶液于 -40℃条件下长期保存，备用。 4.2.4 接种物繁殖 菌株接种于 PDA培养基上， 25℃下培养至长出菌丝。从菌落边缘取菌饼转移 至燕麦片培养基上 ， 置于 25℃培养箱中培养至菌丝长满所有燕麦片，备用于接种。 4.3 鉴定植株 培养 4.3.1 室内 选用长10 cm×宽 10 cm×高 8 cm的花盆播种籽粒饱满的花生种子 4粒，保苗 3株。每个品种播种 3盆，置于人工气候箱内培养，培养条件为：温度 28℃/23℃（昼 /夜）、光周期 16 h/8 h（昼 /夜）、光 照强度 400 µ mol /(m2·s)～600 µ mol/(m2·s)、相对湿度 60%～70%，定期浇水。 种子质量应符合 GB 4407.2 的规定。 4.3.2 田间 4.3.2.1 圃地选择 选择地势平坦、地力均匀 、排灌方便，具备良好自然发病条件的地块 。 4.3.2.2 试验设计 单个小区面积 3 m×4.2 m，按随机区组排列。在单个小区内，每个鉴定材料种植 7行，单粒播种， 保苗 100株，设 3次重复。鉴定材料播种时间、耕作管理方式与生产田相同。 5 接种 5.1 室内 5.1.1 接种时期 以4叶期为宜。 5.1.2 接种方法 采用燕麦埋土接种法 。每个品种接种 9株，将培养好 的带菌燕麦片 （接种物） 埋入植株茎基部周围 2 cm深的土层中， 每株 1 g。 5.1.3 接种后管理 接种后的植株管理同本文件 4.3.1。 5.2 田间 5.2.1 接种时期 以结荚初期为宜 。 DB21/T 4355—2025 3 5.2.2 接种方法 采用燕麦埋土接种法。 每个品种随机选择 10株，将培养好的 带菌燕麦片 （接种物） 埋入植株茎基 部周围 2 cm深的土层中， 每株 1 g。 5.2.3 接种前后管理 鉴定材料整个生长季不施用杀菌剂，同一项操作在同一天完成。要保持田间大气湿度，若遇干旱天 气，应及时浇灌，满足发病条件。 6 病情调查 6.1 调查时间 6.1.1 室内 接种 4 d后开始调查， 每2 d调查 1次，共7次。 6.1.2 田间 接种 7 d后开始调查， 每3 d调查 1次，共7次。 6.2 调查方法 目测每份鉴定材料群体发病情况，逐株调查，根据症状描述，记录每份材料病情级别。 病情以严重 度（即植株所表现的系统性 病害症状程度 ）进行衡量。病情级别 、相对应的症状描述 见表 1。 表1 花生抗白绢病鉴定病情级别划分 病情级别 症状描述 0 植株无病害症状； 1 植株茎基部变褐，全株无系统症状； 3 植株茎基部软腐，出现云纹状病斑，全株 ≤25%发生枯黄萎蔫等系统症状； 5 植株病斑环绕茎基部一圈，全株 25%～50%发生枯黄萎蔫等系统症状； 7 植株茎基部组织腐烂、皮层脱落，全株 ≥50%发生枯黄萎蔫等系统症状； 6.3 计算病情指数 根据调查鉴定材料的植株数和每株的病情级别，按公式（ 1）计算病情指数（ Disease index: DI ）： ∑ ………………………… ………………………… （1） 式中： DI——病情指数； s ——各病情级别的代表数； n ——各病情级别的植株数； N ——调查总植株数； S ——最高病情级别的代表数。 DB21/T 4355—2025 4 7 抗病性评价 7.1 计算相对抗病指数 供鉴材料的相对抗病指数 （RRI）按公式（ 2）计算： 𝑅𝑅 −品种病情指数 最感品种 病情指数……………………………………… ………（2） 7.2 抗性评价标准 依据供鉴材料相对抗病指数（ RRI）确定其抗性水平， 花生抗白绢病评价标准 见表2。 表2 花生抗白绢病评价标准 相对抗病指数（ RRI） 抗性评价 RRI =1.0 免疫（ Immunity ；IM） 1.0＞RRI＞0.80 高抗（ Highly Resistant ；HR） 0.80≥RRI＞0.50 抗（ Resistant；R） 0.50≥RRI＞0.20 感（ Sensitive；S） 0.20≥RRI≥0 高感（ Highly Sensitive ；HS） 7.3 重复鉴定 初次鉴定时表现为免疫、高抗和抗病的花生品种应在次年进行 田间重复鉴定。 7.4 抗性评价 对初次鉴定结果 和重复鉴定结果进行比较 ，以记载的最高病情级别为最终鉴定结果 ，并依此结果 对鉴定材料进行抗性评价 。 8 鉴定结果汇总 花生抗白绢病鉴定结果整理后填入鉴定结果表格，见表 3。 表3 年花生抗白绢病鉴定结果 编号 品种名称 来源 病情级别 平均病指 抗性评价 0级 1级 3级 5级 7级 播种日期： 接种日期： 接种生育期： 接种病原菌分离物编号： 调查日期： 鉴定技术负责人（签字）：